1、柱壓問題柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。
1.1 壓力過高：
這是高效液相在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應該分段進行檢查。
(1) 首先斷開真空泵的入口處，此時，PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果，液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。
處理方法：
用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，再檢查；
(2) 打開Purge閥，使流動相不經過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。
處理方法：
將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI(6.7Bar)以下，過濾白頭正常，再檢查；
(3) 把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。
處理方法：
如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質導致堵塞，則要用比現在流動相更強的流動相沖至壓力正常。
假如，按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但是，一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以，盡量少用。
1.2 壓力過低
壓力過低的現象一般是由于系統泄漏
處理方法：
尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當然，還有一個原因就是泵里進了空氣，但此時表現的往往是壓力不穩，忽高忽低，更嚴重一點會導致泵無法吸上液體。
處理方法：
打開Purge閥，用3～5mL/min的流速沖洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。
2、漂移問題主要包括基線漂移和保留時間漂移。
2.1 基線漂移
一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要半個小時的平衡時間，如果，你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長，但是，如果你在實驗過程中發現基線漂移，則你要考慮下面的原因：
① 紫外燈能量不足。
解決方法：
更換新的紫外燈；
② 柱溫波動。
解決方法：
控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調對著柱溫箱。
③ 流通池被污染或有氣體。
解決方法：
用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(最好斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
④ 流動相污染、變質或由低品質溶劑配成。
解決方法：
檢查流動相的組成，使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑。
⑤ 樣品中有強保留的物質(高K'值)以饅頭峰樣被洗脫出，從而，表現出一個逐步升高的基線。
解決方法：
使用保護柱，如有必要，在進樣之間。在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。
⑥ 檢測器沒有設定在最大吸收波長處。
解決方法：
將波長調整至最大吸收波長處；
⑦ 流動相的pH值沒有調節好。
解決方法：
加適量的酸或堿調至最佳pH值；
2.2 保留時間漂移
保留時間重現是液相性能好壞的一個重要標志，同一種東西，兩次的保留時間相差不要超過15s，超過了半分鐘可看做保留時間漂移，就無法進行定性，你要考慮以下原因：
① 溫控不當。
解決方法：
調好柱溫，檢查是否有打開的窗戶或空調對著柱溫箱。
② 流動相比例變化。
解決方法：
檢查四元泵的比例閥是否有故障。
③ 色譜柱沒有平衡。
解決方法：
在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱。
④ 流速變化。
解決方法：
重新設定流速。
⑤ 泵中有氣泡。
解決方法：
從泵中除去氣泡。
2.3 峰型異常問題
峰型問題是液相的主要問題，在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰，要區別對待，從主要問題出發，一個一個加以解決。
① 所有峰均為寬峰。
解決方法：
系統未達到平衡；
溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多；
色譜柱尺寸及類型選擇不正確；
色譜柱或保護柱被污染或柱效降低；
溫度變化造成的影響。
② 所出峰比預想的小。
解決方法：
樣品黏度過大；進樣品故障或進樣體積誤差；檢測器設置不正確，定量環體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現問題。
③ 色譜圖中未出峰。
解決方法：
系統未進樣或樣品分解；
泵未輸液或流動相使用不正確；
檢測器設置不正確；
針對以上情況成因作相應調整即可。。。
④ 一個峰或幾個峰是負峰。
解決方法：
流動相吸收本底高；進樣過程中進入空氣；樣品組分的吸收低于流動相。
⑤ 所有峰均為負峰。
解決方法：
信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒；
光學裝置尚未達到平衡。
⑥ 出現雙峰或肩峰。
解決方法：
進樣量過大；樣品濃度過高；
保護柱或色譜柱柱頭堵塞；
保護拄或色譜柱污染或失效；
柱塌陷或形成短通道。
⑦ 前伸峰。
解決方法：
進樣量或樣品濃度高；
溶解樣品的溶劑較流動。
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