上海辰麥檢測技術中心日常生物TEM透射電鏡測試的一般步驟、方法和注意事項如下: 1.取 材 根據實驗目的取材,要求部位準確,體積小于1 mm3;
2.醛類固定 用2%~3%的戊二醛固定8小時;
3.清 洗 用磷酸緩沖液清洗3次,每次10分鐘;
4.鋨酸固定 用1%~2%的鋨酸固定 2~3小時;
5.清 洗 用磷酸緩沖液清洗3次,每次10分鐘;
6.脫 水 用30%、50%、70%、80%、90%的乙醇梯度脫水各20分鐘,100%乙醇脫水3~4次,每次30分鐘;
7.置 換 用環氧丙烷或丙酮置換3次,每次30分鐘;
8.浸 漬 3(丙酮)︰1(包埋劑)浸漬1~2h; 1(丙酮)︰1(包埋劑)浸漬4~6h; 1(丙酮)︰3(包埋劑)浸漬12h或過夜; (體積比V/V);
9.包 埋 第二天上午10點左右,把3:1浸漬好的樣品直接放到加好純包埋劑的包埋板里,包埋劑為Epon812;
10.聚 合 放入35℃烘箱,3~4h后取出來,把樣品定向、定位后再放回35℃烘箱。24h后,把烘箱溫度調到40℃,聚合48h, 60℃聚合48h,聚合完成;
11.修 塊 將包埋頭修成梯形,且樣品表面積小于0.2mm×0.2mm;
12.超薄切片 切片厚度50~90nm, 切片機:萊卡UC7;
13.染 色 鈾染色 5~15分鐘 清 洗鉛染色 5~10分鐘 清 洗;
14.拍 照 設備加速電壓80kv.
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