分光光度法測定中，除了需從試樣的角度選擇合適的顯色反應和顯色條件外，還需從可見分光光度計/紫外可見分光光度計等儀器的角度選擇適宜的測定條件，以保證測定結果的準確度。
1.入射光波長的選擇
在最大吸收波長處測定吸光度不僅能獲得高的靈敏度，而且還能減少由非單色光引起的對朗伯-比爾定律的偏離。因此在分光光度法測定中一般選擇最大吸收波長為入射波長。
2. 參比溶液的選擇
在實驗中，要選擇合適的空白溶液作為參比溶液來調節儀器的零點，以便消除顯色溶液中其他有色物質的干擾，抵消吸收池和試劑對入射光的影響。根據試樣溶液的性質，選擇合適組分的參比溶液很重要。
3. 吸光度范圍選擇與控制
任何分光光度計都有一定的測量誤差，測量誤差的來源主要是光源的發光強度不穩定法，光電效應的非線性，電位計的非線性，雜散光的影響，單色器的光不純等因素，對于一臺固定的分光光度計來說，以上因素都是固定的，也就是說它的誤差具有一定穩定性。
4.比色皿的使用
選擇適宜規格的比色皿，盡量把吸光度值調整在0.2~0.8之間。同一實驗使用同一規格的同一套比色皿，以減少測量誤差，所以用普通分光光度法不適用于高含量或極低含量物質的測定。

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