防腐劑是一種能夠抑制食品中微生物生長(zhǎng)和繁殖的化學(xué)物質(zhì)。如果按照國(guó)家規(guī)定的數(shù)量使用，不僅可以防止食品生霉，而且可以防止食品變質(zhì)或腐敗，并能延長(zhǎng)保存時(shí)間，同時(shí)對(duì)食用者也不會(huì)引起什么危害。因此，對(duì)防腐劑的使用必須控制一定的使用量，而且應(yīng)具備以下特點(diǎn)：

⑴ 凡加入食品中的防腐劑，首先是對(duì)人體無(wú)毒、無(wú)害、無(wú)副作用的；

⑵ 長(zhǎng)期使用添加防腐劑的食品，不應(yīng)該使機(jī)體組織產(chǎn)生任何的病變，更不能影響第二代發(fā)育、生長(zhǎng)；

⑶ 加入防腐劑之后，對(duì)食品的質(zhì)量不能有任何的影響和分解；

⑷ 食品加入防腐劑之后，不能掩蔽劣質(zhì)食品的質(zhì)量或改變?nèi)魏胃泄傩誀睢?/p>

我國(guó)允許使用的防腐劑有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對(duì)羥基苯甲酸乙酯及丙酯等。其中前兩種應(yīng)用廣泛。

苯甲酸及其鹽類(lèi)使用范圍：醬油、醋、果汁類(lèi)、果醬類(lèi)、葡萄糖、罐頭，最大使用劑量1g／公斤；汽酒、汽水、低鹽醬菜、面醬類(lèi)、蜜餞類(lèi)、山楂糕、果味露，每公斤最多使用0.5g。

山梨酸及其鹽類(lèi)在醬油、醋、果醬類(lèi)中，每公斤最多允許使用1g；對(duì)低鹽醬菜類(lèi)、面醬類(lèi)、蜜餞類(lèi)等使用0.5g/㎏。

苯甲酸隨食品進(jìn)入體內(nèi)時(shí)與甘氨酸結(jié)合成馬尿酸，從尿液中排出體外，不再刺激腎臟；山梨酸進(jìn)入機(jī)體后參與新陳代謝，最后生成CO₂和H₂O，被排出體外，由于山梨酸及其鹽類(lèi)價(jià)格貴一般不常用，多數(shù)用在出口食品中。

苯甲酸又名安息香酸，為白色有絲光的鱗片或針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)122℃，沸點(diǎn)249.2℃，100℃開(kāi)始升華。在酸性條件下可隨水蒸汽蒸餾，微溶于水，易溶于氯仿、丙酮、乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑，化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定。

苯甲酸鈉易溶于水和乙醇，難溶于有機(jī)溶劑，與酸作用生成苯甲酸。

山梨酸為無(wú)色、無(wú)臭的針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)134℃，沸點(diǎn)228℃。山梨酸難溶于水，易溶于乙醇、乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑，在酸性條件下可隨水蒸汽蒸餾，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

山梨酸鉀易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑，于酸作用生成山梨酸。苯甲酸與山梨酸兩種防腐劑主要用于酸性食品的防腐。

一、苯甲酸及其鹽類(lèi)的測(cè)定

測(cè)定方法： （1） 中和法（堿滴定法）--應(yīng)用廣泛

（2） 紫外分光光度法

（3） 薄層層析法

（4） 氣象色譜法

（5） 高壓液相色譜法

（一）中和法

1、原理

在弱酸條件中，用乙醚將樣品中的苯甲酸提取出來(lái)，將乙醚揮發(fā)后，用中性酒精或醇醚混合物溶解內(nèi)容物，用酚酞做指示劑，采用0.1N標(biāo)準(zhǔn)N_aOH滴定至終點(diǎn)，然后根據(jù)氫氧化鈉消耗的體積計(jì)算苯甲酸或苯甲酸鈉的含量。

2、試劑

3、樣品的處理

⑴ 固體或半固體樣品（各種果醬）

稱100g樣→與500ml容量瓶中→加200ml水→加AR NaCl直到不溶解為止（降低苯甲酸在水中溶解度）→用10%NaOH調(diào)為堿性（這時(shí)苯甲酸生成苯甲酸鈉，并以苯甲酸鈉狀態(tài)存在）→用飽和NaCl定容500ml→靜置2小時(shí)→過(guò)濾→棄去初液→收集濾液

⑵ 含酒精樣品（各種汽飲料等）

取250ml樣→于燒杯中→加10%NaOH呈堿性→置水浴蒸發(fā)至100ml（除去C₂H₅OH）→移入250ml容量瓶→加30gNaCl溶解后→用飽和NaCl定容→放置2小時(shí)→過(guò)濾→收集濾液

⑶ 含多量脂肪樣品

于上述制備好的濾液中→加NaOH使之成為堿性→加50ml乙醚提取→靜置分層后→棄去醚層→溶液供測(cè)定用

4、操作方法　

吸濾液100ml→于500ml分液漏斗→加1︰1 HCl 5ml酸化→用150ml乙醚分三次提取→每次振蕩不能太激烈以防乳化→合并醚層→連接蒸餾裝置→回收乙醚（50℃水浴）→用10ml中性乙醇+10ml水溶解殘?jiān)?rarr;加2滴酚酞→用0.1N NaOH滴出微紅色（同時(shí)要求做空白實(shí)驗(yàn)　）

5、計(jì)算

苯甲酸含量%=(N·V×0.122/W)×100

=(N·V×0.1441/W)

N : 標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉的濃度

V: 標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉消耗的體積

W : 樣品重量

0.122 : 1ml0.1N 氫氧化鈉約等于苯甲酸的克數(shù)

0.1441 : 1ml0.1N 氫氧化鈉約等于苯甲酸鈉的克數(shù)

采用此方法測(cè)苯甲酸及其鹽類(lèi)最大缺點(diǎn)是：樣品中有其它有機(jī)酸時(shí)，乙醚萃取時(shí)易帶過(guò)來(lái)，所以此法測(cè)定誤差較大。

（二）紫外分光光度法

1、原理

樣品中苯甲酸在酸性溶液中可以用水蒸汽蒸餾的方法蒸餾出來(lái)，與樣品中不揮發(fā)性成分分離，然后用強(qiáng)酸氧化，使苯甲酸以外的其它有機(jī)物氧化分解，氧化后的溶液再次蒸餾，蒸餾液中除苯甲酸外的其它雜質(zhì)基本都被分解了，根據(jù)苯甲酸的吸收波長(zhǎng)225nm下測(cè)定消光值。

樣品中加1ml磷酸經(jīng)水蒸汽蒸餾，得到的餾液主要是苯甲酸，還有其它酸物，再加入0.2N的K₂Cr₂O₇和4N的H₂SO₄，將其它酸性物質(zhì)氧化，再經(jīng)過(guò)蒸餾，得到無(wú)雜物的苯甲酸，在225nm下測(cè)定。

苯甲酸用紫外的原因是甲酸同苯形成p-π共軛體系，適合紫外分光光度儀測(cè)定。

此實(shí)驗(yàn)要求做空白，空白中不加磷酸，因苯甲酸在堿性溶液中不能被蒸餾出來(lái)的特點(diǎn)（樣品+1N NaOH5ml）→蒸餾苯甲酸（g/㎏）= C / W * 1000

（三）薄層層析法

原理：樣品經(jīng)過(guò)酸化后，用乙醚提取苯甲酸，然后將樣品濃縮，濃縮后點(diǎn)樣于聚酰胺薄層板上，經(jīng)展開(kāi)，顯色后，根據(jù)比移值與標(biāo)準(zhǔn)比較定性，并進(jìn)行定量。

（四）氣相色譜法

原理：用乙醚提取后，采用氫火焰離子檢測(cè)器進(jìn)行分離測(cè)定，然后與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。

（五）高壓液相色譜法

原理：樣品處理后，注入高效液相色譜儀中，利用被測(cè)組分在固定相和移動(dòng)相中分配系數(shù)的不同，使被測(cè)組分分離，用紫外檢測(cè)器在特定波長(zhǎng)下測(cè)定被測(cè)組分的吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)比較定性和定量。

二、山梨酸及其鹽的測(cè)定

測(cè)定方法：

（1） 比色法（硫代巴比妥酸比色法）

（2） 紫外分光光度法

（3） 薄層層析法

（4） 氣相色譜法

（5） 高壓液相色譜法

（一）硫代巴比妥酸比色法

1、原理

樣品中的山梨酸在酸性溶液中，用水蒸汽蒸餾出來(lái)，然后用K₂Cr₂O₇氧化成丙二醛和其它產(chǎn)物，丙二醛與硫代巴比妥酸反應(yīng)，生成紅色物質(zhì)，顏色的深淺與山梨酸含量成正比。（530nm下測(cè)定）

2、操作方法

⑴ 樣品制備

稱取100g左右的樣品→加蒸餾水250ml→在高速搗碎機(jī)上打漿→定容500ml→過(guò)濾→收集濾液

⑵ 山梨酸的提取

準(zhǔn)確吸取兩份濾液各20ml→分別放入兩個(gè)250ml蒸餾瓶中→一個(gè)瓶加1ml磷酸、無(wú)水硫酸鈉20g、水70ml、玻璃珠3粒→另一瓶加1N NaOH5ml、無(wú)水硫酸鈉20g、水70ml、玻璃珠3粒→蒸餾→分別用裝有10ml0.1N NaOH的100ml容量瓶接收餾液→當(dāng)餾液收集到80ml停止蒸餾，用少量水洗滌冷凝管→定容→分別吸10ml溶液→分別置于兩個(gè)100ml容量瓶→用0.01N NaOH定容→供樣液、空白測(cè)定用

⑶ 測(cè)定

準(zhǔn)確吸樣液、空白液2ml→于25ml比色管中→加水3ml→加2ml（K₂Cr₂O₇+硫酸）混合液→在100℃水浴5分鐘→加0.5%硫代巴比妥酸2ml→沸水浴加熱7分鐘→冷卻→定容→于1cm比色杯在530nm處比色

⑷ 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

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